加样品：将标本稀释液加到包被板内，将需要检测的血清用PBS或生理盐水按照1：20的比例稀释后取10ul加入到酶标板的反应孔内。
加对照：加入阴性对照3孔，阳性对照1孔，还有100ul的对照血清。
进行温育：将反应板震荡，使样品充分的混匀，置于37℃的温箱或者水浴反应20分钟的时间。
洗板：用蒸馏水将洗涤液15ml稀释至300ml的体积。手洗的时候应该将反应板孔内的容物倾出，将洗涤液注满反应孔的位置，然后放置30秒钟后用力甩去，这样的动作重复5次后开始拍干。机洗需要进行5次，每孔注入洗涤液200ul或者可以注满，然后停留30秒钟后吸尽拍干。
加酶标工作液：在每孔内加入100ul的酶标工作液，放置到37℃的温箱中，反应20分钟后洗板5次，洗板的操作和上述步骤4是相同的。
这是反应的最后一步，就是显色和终止反应：将底物50ul加到反应孔内，37℃条件下避光显色10分钟的时间。在每孔内加入终止液50ul混匀用以终止反应。
酶标板的使用需要在无菌的条件下进行。在酶标板使用之前和之后都要认真的进行消毒和清洗，但是需要注意的是有的酶标板在消毒之前需要认真的阅读说明书，看是否可以进行高温消毒。