（1）取本品约1mg，加水100ml溶解后，溶液在透射光下显淡黄色并有强烈的黄绿色荧光；加无机酸或碱溶液，荧光即消失。
（2）取本品，加磷酸盐缓冲液（pH7.0）制成每1ml中含10μg的溶液，用紫外-可见分光光度法测定，在267nm、372nm与444nm的波长处有最大吸收，在240nm的波长处有最小吸收。
（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图借一致。
（4）取本品0.5g，加硝酸10ml，在水浴上蒸干，炽灼，残渣加水5ml使溶解，必要时滤过，滤液显钠盐的鉴别反应。
核黄素磷酸钠的含量测定：
避光操作 取本品约0.1g，精密称定，置500ml量瓶中，加冰醋酸2ml与水75ml，使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加1.4%醋酸钠溶液7ml，用水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在444nm的波长处测定吸光度，按C17H20N4O6的吸收系数（E1%/1cm）为323计算，即得。