交联葡聚糖凝胶制备及使用方法
2020-02-26
SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephadex。英文字母G表示不同规格和型号的右旋糖酐。G后面的阿拉伯数字是凝胶水值的10倍。例如，G-25每克凝胶吸收2.5克水，而G-200每克干胶吸收20克水。交联葡聚糖凝胶的类型是G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150和G-200。因此，“ G”反映了凝胶的交联度，溶胀度和分布。
制备：
葡聚糖凝胶微珠具有两个缺点：颗粒聚集和表面粗糙度。颗粒附聚的原因是分散剂聚乙酸乙烯酯（PVAc）在碱性条件下水解以增强亲水性，并且交联反应的中间产物发生絮凝。另外，交联后颗粒粘度的增加也可能引起聚集。葡聚糖微珠的粗糙表面是由于在后处理过程中未完全从微珠表面除去PVAc的微小附着物而引起的。作者采用低温分散，交联，逐步添加交联剂以及调节搅拌速度等方法来有效地控制上述问题。
使用：
1.浸泡在乙醇中：在室温下，将干粉在50-60％的乙醇中浸泡至少24小时，并保持搅拌以确保凝胶膨胀。不用盐水洗涤剩余溶液，将乙醇过滤干燥。
2.不用盐水浸泡。在室温下在无盐水中充分溶胀24小时，在间隙中搅拌以确保凝胶完全溶胀，然后3.盐酸浸泡：
在室温下用0.2N HCl浸泡12小时，在间隙中搅拌，过滤干燥，然后洗涤至中性。
4.根据色谱柱要求对溶胀的凝胶进行脱气（真空过滤或超声波）后，一次将其放入色谱柱中，注意使色谱柱保持湿润状态，并避免色谱柱中出现气泡或故障；
5.在上样之前，使色谱柱至少平衡3-5柱体积，直到记录仪的基线变得稳定为止。 （流出物的pH值等于柱上缓冲液的pH值）；
6.凝胶过滤的装载量通常为床体积的5％。我们建议将初始负载控制在床的1-2％。音量可根据分离情况进行调整；脱盐时样品量可达到床体积的20％，柱高的选择还取决于分离要求。失控的凝胶层下方40-50cm的柱高会导致过大的背压变大，应尽量避免。
难以分离的物质应具有一定的色谱柱高度和流速控制。脱盐时，高径比可以为5：1。洗脱；梯度洗脱液（如NaCl或盐梯度洗脱液）也可以在上层色谱柱缓冲液中完全分离和纯化。
8.就地清洁（CIP）
CIP只能使用十次。从床上去除沉淀的顽固残留蛋白。该方法是用1M氢氧化钠以40 cm/h的速度反向洗涤4个柱体积，并用至少3个柱体积平衡缓冲液进行再生。
制备：
葡聚糖凝胶微珠具有两个缺点：颗粒聚集和表面粗糙度。颗粒附聚的原因是分散剂聚乙酸乙烯酯（PVAc）在碱性条件下水解以增强亲水性，并且交联反应的中间产物发生絮凝。另外，交联后颗粒粘度的增加也可能引起聚集。葡聚糖微珠的粗糙表面是由于在后处理过程中未完全从微珠表面除去PVAc的微小附着物而引起的。作者采用低温分散，交联，逐步添加交联剂以及调节搅拌速度等方法来有效地控制上述问题。
使用：
1.浸泡在乙醇中：在室温下，将干粉在50-60％的乙醇中浸泡至少24小时，并保持搅拌以确保凝胶膨胀。不用盐水洗涤剩余溶液，将乙醇过滤干燥。
2.不用盐水浸泡。在室温下在无盐水中充分溶胀24小时，在间隙中搅拌以确保凝胶完全溶胀，然后3.盐酸浸泡：
在室温下用0.2N HCl浸泡12小时，在间隙中搅拌，过滤干燥，然后洗涤至中性。
4.根据色谱柱要求对溶胀的凝胶进行脱气（真空过滤或超声波）后，一次将其放入色谱柱中，注意使色谱柱保持湿润状态，并避免色谱柱中出现气泡或故障；
5.在上样之前，使色谱柱至少平衡3-5柱体积，直到记录仪的基线变得稳定为止。 （流出物的pH值等于柱上缓冲液的pH值）；
6.凝胶过滤的装载量通常为床体积的5％。我们建议将初始负载控制在床的1-2％。音量可根据分离情况进行调整；脱盐时样品量可达到床体积的20％，柱高的选择还取决于分离要求。失控的凝胶层下方40-50cm的柱高会导致过大的背压变大，应尽量避免。
难以分离的物质应具有一定的色谱柱高度和流速控制。脱盐时，高径比可以为5：1。洗脱；梯度洗脱液（如NaCl或盐梯度洗脱液）也可以在上层色谱柱缓冲液中完全分离和纯化。
8.就地清洁（CIP）
CIP只能使用十次。从床上去除沉淀的顽固残留蛋白。该方法是用1M氢氧化钠以40 cm/h的速度反向洗涤4个柱体积，并用至少3个柱体积平衡缓冲液进行再生。
