WB目标蛋白跑成一条直线是为什么?
2024-11-13
小份子量蛋白,内参和其他的目标蛋白都很正常,目标蛋白跑成一条直线或是中间缝隙都是黑点,已经降低上样量,每孔3ul,浓度是5,上胶和分离胶都凝了半个小时。
一般来说,是因为以下几个原因造成的:
1、蛋白浓度过高:上样量过大,会导致蛋白在电泳过程中无法有效分离,从而形成一条直线。这是因为过多的蛋白在同一泳道内相互挤压,迁移速度变得极为接近,最终无法呈现出清晰的条带。
2、蛋白发生降解:蛋白样品如果保存不当或放置时间过长,可能会发生降解。降解后的蛋白产生一系列大小不等的片段,在电泳时这些片段会在不同位置形成弥散的条带,严重时可能看起来像一条直线。
3、样品中存在杂质:样品中含有如核酸、多糖等杂质,这些杂质可能会与蛋白质相互作用或影响电泳的电场分布,导致蛋白质迁移异常,出现条带模糊或呈直线的情况。
但鉴于这个问题已经降低了上样量,那么可以试一下降低样品浓度,或者检查一下杂质原因。
中文名称:超低分子量蛋白质Marker(3.3-20.1kDa)