线粒体提取yabo官网手机版 盒使用注意事项
核线粒体的分离原理:
1.通过机械方法破裂细胞。
2.通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞。
3.通过高速差速离心获得线粒体。
使用注意事项:
1.全程低温操作,将样品管放在冰水浴而不是碎冰中。
2.快速、微量制备比大规模制备操作更方便快捷,因而更容易获得完整的线粒体。
3.在不破坏亚细胞器的情况下、破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃均浆时较难破壁,因而要选小容量、玻璃均浆器,间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。在相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右。研磨过度将破坏线粒体。研磨不足会降低得率。
4.离心力g计算正确的离心速度,不同离心机可依据此精确计算离心速度。
5.进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入样品缓冲液裂解线粒体。